1、 开机顺序。先打开计算机电源，待启动稳定至桌面后，再打开1525泵、1500柱温箱、2707自动进样器及2489紫外或2424蒸发光散射检测器电源。待仪器自检完成启动正常后，双击桌面Empower3图标，输入用户名、密码，确定后，选择相应的项目和需使用的色谱系统，进入色谱工作站。
2、 配制新鲜流动相及洗针液。液相分析用流动相均需色谱级试剂，且需用至少0.45um质量可靠滤膜过滤。有机溶剂用有机系滤膜过滤，水及缓冲盐溶液用水系滤膜过滤。2707洗针液可用50%水/50%有机相，有机相一般为甲醇或乙腈，与所用流动相有机相一致；也可根据所分析化合物性质调节洗针液组成，而更容易洗去残留于进样针上样品。
3、 准备仪器。
1) 1525泵灌注排气泡。将A、B泵溶剂进口吸滤头放入相应盛有新鲜配制流动相的溶剂瓶中。将随机带10ml注射器插入位于两个泵头之间圆形黑色抽液阀中，向左打开抽液阀，慢慢抽出流动相约20ml排掉，然后向右拧紧抽液阀；然后将位于两泵间靠右位置的参比阀手柄扳至右边，通过软件设置相应泵流速至3--5ml/min，将流动相排空5分钟左右排泵头气泡。将流速设为0停流速后，将参比阀手柄扳至左边恢复流路，即连接系统状态。
2) 2707 进样注射器排气泡。右键点击empower3 2707控制面板，选择purge syringe，在弹出对话框中一般设定purge循环次数3次。若2707在purge过程中发现注射器有气泡，可将purge次数加大直至气泡排出；若气泡仍不能排出，可换纯甲醇purge至气泡排出，再换为洗针液purge3次。
4、 建立方法组
5、 平衡系统/监视基线。通过Empower3泵控制面板缓慢将相应泵的流速根据流动相初始比例设置为目标分析流速。通过Empower3仪器方法控制面板，选择相应的仪器方法，点击设置按钮仪器将按仪器方法中参数运行，点击平衡/监视器按钮，仪器按仪器方法中参数运行的同时，可在软件实时窗口监视基线。待系统压力稳定基线平稳后，停止监视。
6、 建立样品组，运行样品组。可先运行1次进样，确认分离度、峰相应、峰形满足分析要求后再创建所需样品组运行，否则需重新优化仪器方法。
7、 数据处理，出报告。
8、 实验结束，清洗色谱柱，停流速关机。
1） 若流动相为乙腈、甲醇、水不含缓冲盐溶剂，用所用有机相甲醇或乙腈冲洗色谱柱30分钟左右即可。若流动相含有缓冲盐，先用高比例水如90%水/10%有机相冲洗色谱柱至少1小时，再用纯有机相冲洗色谱柱30分钟。色谱柱最后用纯甲醇或纯乙腈保存。
2） 仪器系统长期不用（一般>7天），将A、B溶剂管路放入纯甲醇中，用纯甲醇冲洗整个系统，系统保存于纯甲醇中。
3） 关机顺序。停流速后先关闭Empower3工作站，再关仪器电源，最后关计算机电源。
1525 型分析半制备高效液相色谱仪使用注意事项
1、若使用缓冲盐流动相，使用前要保证溶剂间的互溶性，若之前管路中为纯有机相，需用纯水冲洗管路后再替换为缓冲盐溶液。
2、若流动相中有缓冲盐，需先用高比例水如90%水/10%有机相冲洗整个色谱系统30分钟后再用含有缓冲盐的流动相平衡系统。
3、若使用2424蒸发光散射检测器，在流动相进入检测器前，先确保已在2424检测器面板上设置氮气压力20---60psi（一般可设25psi，设置后即有氮气通过检测器），同时确保漂移管温度已升至设置温度（一般可设50度），才可将色谱柱出口管线连接至2424检测器进口，平衡检测器至响应稳定。
waters 1525 分析半制备高效液相色谱仪送样须知
液体、固体等分子量不超过2000 Da的有机化合物，可溶解于水或有机溶剂。
1525 型分析半制备高效液相色谱仪主要技术指标
WATERS二元梯度泵：流速范围0.01~10.00ml/min，流速精度0.1%RSD，全流程耐压6000psi；
2489紫外-可见光检测器：波长范围：190-700nm 波长准确度:+-1nm,带宽5nm
2424蒸发光散射检测器：灵敏度1.0ng,流速：300-3000ul/min,漂移管控温>120度